Методы забора биологического материала при туберкулезе

Обновлено: 27.04.2024

Пресс-центр

В Чувашской Республике проходит акция «Белая ромашка», посвященная Всемирному дню борьбы с туберкулезом, которая продлится до 20 апреля. О существовании этого недуга люди знали с древнейших времен. И в настоящее время туберкулез продолжает оставаться ведущей инфекционной болезнью, уносящей жизни людей во всем мире. Для

В распознавании и дифференциальной диагностике туберкулеза, а также в эффективности проводимого лечения очень важную роль играют лабораторные методы исследования. На наиболее распространенные вопросы о лабораторной диагностике туберкулеза отвечает заведующий бактериологической лабораторией Ольга Стебловская.

- Ольга Евгеньевна, расскажите, что такое МБТ?

Это туберкулёзные палочки - Микобактерии туберкулеза (МБТ).

- Где же находят эти туберкулёзные палочки?

При туберкулезе легких М икобактерии туберкулеза (МБТ) чаще всего находят в мокроте. Как много туберкулезных палочек выделяет больной и как долго зависит от формы туберкулезного процесса. Часто и много выделяют МБТ больные инфильтративным и фиброзно-кавернозным туберкулезом , особенно , если есть полости распада. Реже и гораздо меньше выделяют МБТ больные очаговым и диссеминированным туберкулезом легких. Если мокроты у больного много, МБТ находя т в больше м количестве, а в скудной мокроте МБТ встречается реже и в виде единичных экземпляров.

Второе место по эффективности выделения МБТ у больных, не выделяющих мокроту, занимаю т исследования промывных вод бронхов.

Также можно искать МБТ в плевральной жидкости при плеврите, в моче - при туберкулезе мочеполовых органов, и в других выделениях организма больного.

- Как обнаруживают туберкулёзные палочки в лаборатории?

Частота обнаруж ения МБТ зависит от способа исследования биоматериала :

1. Бактериоскопический метод - поиск МБТ на стекле под микроскопом. Среди бактериоскопических методов больше всего МБТ обнаруживает люминесцентная микроскопия, когда мазок окрашивают светящимися красителями и изучают в люминесцентном микроскопе. Бактериоскопическим методом МБТ обнаруживается чаще при обильном бактериовыделении- 100 000 МБТ в 1 мл материала .

2. Бактериологический способ - посев выделений больного на искусственные питательные среды и получение культуры МБТ с последующим изучением ее свойств. По частоте обнаружения МБТ посев материала на плотные или жидкие питательные среды занимает первое место. Для получения культуры МБТ достаточно всего 20-100 микробов в материале от больного.

При бактериологическом способе исследования удается не только выявить туберкулезные палочки, но и подсчитать их количество, а также изучить лекарственную чувствительность к противотуберкулезным препаратам и составить схему лечения боль ного.

Бактериологический метод ( посев материала на специальные среды) обнаружения МБТ очень высокоточный, но имеет существенный недостаток: для получения культуры требуется 4-12 недель.

Применение жидких питательных сред и специального оборудования (бактериологических анализаторов) позволяет определить рост МБТ уже через 5дней.

3. Молекулярно-генетические методы (ПЦР) - поиск в биоматериале генетических маркеров МБТ. Метод ПЦР очень точен, позволяет проводить исследование небольшого количества материала и обнаружить 5-20 клеток МБТ. По оценкам специалистов метод ПЦР превосходит бакте риоскопический и бактериологический методы, особенно при диагностике внелегочных форм туберкулеза.

В бактериологической лаборатории Республиканского противотуберкулезного диспансера представлен полный спектр методов для диагностики туберкулеза:

- бактериоскопические методы; кл ассический посев и определение л екарственной чувствительности МБТ на плотных средах;

- ускоренная методика на жидких средах с применением бактериологического анализатора BACTEC MGIT 960 ;

- молекулярно-генетические методики: ПЦР В РЕАЛЬНОМ ВРЕМЕНИ и методика HAIN TEST .

Правила забора биологического материала

Для получения плазмы забор крови производят натощак или через 3 часа после приема пищи из локтевой вены одноразовой иглой (диаметр 0,8 − 1,1 мм) в специальную вакуумную систему (сиреневые крышки − 6% ЭДТА) или одноразовым шприцем в пластиковые пробирки с цитратом натрия (3,8%-ный раствор цитрата натрия в соотношении 1:9), объем крови 4 мл. Пробирку закрывают крышкой и аккуратно переворачивают несколько раз вверх дном, чтобы кровь в пробирке тщательно перемешалась с антикоагулянтом (в противном случае кровь свернется, и выделение ДНК/РНК станет невозможным).

Гепарин в качестве антикоагулянта использовать нельзя! Для получения сыворотки забор крови проводят натощак из локтевой вены одноразовой иглой (диаметр 0,8 − 1,1 мм) в одноразовые пробирки без антикоагулянта.

Условия хранения и перевозки материала:

- при температуре 20−25 °С — в течение 6 часов;

- при температуре +2+8 °С — в течение 6 часов с момента взятия материала для количественного определения нуклеиновых кислот; в течение 12 ч − для качественного определения нуклеиновых кислот и для определения полиморфизма в геноме человека. Транспортировать в вертикальном положении!

Для анализа отбирают первую порцию утренней мочи в количестве 15−25 мл в специальный сухой стерильный флакон или контейнер на 50-60 мл как у мужчин, так и у женщин. У женщин сбор мочи проводится после тщательного туалета наружных половых органов, чтобы в мочу не попали выделения из них. Желательно закладывать тампон во влагалище перед сбором материала для предупреждения контаминации мочи отделяемым из влагалища. Также не следует производить сбор мочи во время менструации.

У мужчин при мочеиспускании необходимо полностью оттянув кожную складку, освободить наружное отверстие мочеиспускательного канала.

При определении микобактерий туберкулеза для анализа отбирают среднюю порцию утренней мочи в количестве 15−25 мл в специальный сухой стерильный флакон или контейнер на 50-60 мл.

Условия хранения и перевозки материала:

- при температуре +2+8 °С – в течение 3 суток.

- Соскобное отделяемое из цервикального канала

- Соскоб из уретры у мужчин и женщин

- Соскоб крайней плоти головки полового члена (ГПЧ)

Транспортная среда с муколитиком

Решение о необходимости исследовать ту или иную локализацию (влагалище, уретра, цервикальный канал и др.) для анализа принимает лечащий врач на основании совокупности жалоб пациентки (та) и клинической картины заболевания.Для получения объективного результата необходимо, чтобы исследуемый клинический материал содержал возможно большее количество эпителиальных клеток и минимальное количество слизи и примеси крови (допустимо умеренное присутствие примесей в виде крови и слизи). Неправильное взятие биоматериала может привести к невозможности получения достоверного результата и, вследствие этого , необходимости повторного взятия биоматериала.

Порядок взятия клинического материала в пробирку с транспортной средой:

1. Открыть крышку пробирки.

2. С помощью одноразового стерильного зонда получить отделяемое соответствующего

биотопа (влагалище, уретра, цервикальный канал).

3.Перенести зонд с клиническим материалом в пробирку с транспортной средой объемом 1,5 мл, когда зонд упрется в дно пробирки, дополнительным усилием согнуть тонкую часть зонда до насечки, затем отломить и оставить зонд в пробирке .При необходимости получения клинического материала из нескольких биотопов повторить процедуру, каждый раз забирая клинический материал новым зондом в новую пробирку.

3. Пробирку плотно закрыть крышкой, промаркировать.

Особенности взятия клинического материала цервикального канала:

1.Клинический материал цервикального канала получают после введения во влагалище гинекологического зеркала с помощью уретрального зонда или цервикальной цитощетки (для исследования на ВПЧ необходимо достаточное количество эпителиальных клеток!).

2.Перед взятием клинического материала необходимо тщательно обработать отверстие цервикального канала с помощью стерильного марлевого тампона и затем обработать шейку матки стерильным физиологическим раствором.

3.После введения уретрального зонда в шеечный канал на 1,5 см его вращают несколько раз (2-3 полных оборота по часовой стрелке) и извлекают . При извлечении зонда необходимо полностью исключить его касание стенок влагалища.

4. Полученный клинический материал помещается в пробирку с транспортной средой (см. выше).

Особенности взятия клинического материала из влагалища:

В день обследования женщины не должны проводить туалет половых органов и спринцевание влагалища.

1. Клинический материал из влагалища получают с заднего или боковых сводов с помощью вагинального или уретрального зонда путем соскоба с поверхности эпителия.

2. Клинический материал должен быть получен ДО проведения мануального исследования.

3. Перед манипуляцией гинекологическое зеркало можно смочить теплой водой, применение антисептиков для обработки зеркала противопоказано.

4. У девочек (virgo) клинический материал получают со слизистой оболочки преддверия влагалища без использования гинекологического зеркала.

5. Полученный клинический материал помещается в пробирку с транспортной средой (см. выше).

Особенности взятия клинического материала из уретры у женщин:

1. Клинический материал из уретры получают с помощью уретрального зонда.

2.Перед взятием клинического материала пациентке рекомендуется воздержаться от мочеиспускания в течение 1,5-2 часов.

3. При наличии свободных уретральных выделений наружное отверстие уретры следует очистить с помощью ватного тампона.

4. При отсутствии свободных выделений может быть проведен легкий массаж уретры.

5. После введения инструмента в уретру на глубину 1 см необходимо продвигать его к наружному отверстию, слегка нажимая на заднюю и боковые стенки уретры (вращательные движения болезненны).

6. Полученный клинический материал помещается в пробирку с транспортной средой(см. выше).

Для исследования материала ,полученного из нескольких биотопов, процедуру повторяют, каждый раз используя новый стерильный зонд и новую пробирку.

Недопустимо смешивать материал из цервикального канала, влагалищного содержимого и уретры в одной пробирке!

Особенности взятия клинического материала из уретры у мужчин:

Перед взятием биоматериала пациенту рекомендуется воздержаться от мочеиспускания в течение

1,5–2 часов. Для исключения искажений результатов определения состава микрофлоры урогенитального тракта мужчин из-за присутствия в урогенитальном тракте транзиторной микрофлоры в течение трёх дней перед взятием биоматериала рекомендуется половое воздержание или использование защищенного полового контакта.

1.Перед взятием соскоба из уретры обрабатывают головку полового члена в области наружного отверстия уретры тампоном, смоченным стерильным физиологическим раствором.

2.Производят массаж уретры. При наличии свободно стекающих из уретры выделений удаляют их сухим тампоном.

3.Вводят зонд в уретру на глубину 1-2 см. Несколькими вращательными движениями производят соскоб эпителиальных клеток и переносят зонд в пробирку с транспортной средой, обламывают и оставляют. Отделяемое забирают в достаточном количестве. Допустимо умеренное присутствие примесей в виде слизи, крови и гноя.

Взятия клинического материала с крайней плоти головки полового члена (ГПЧ):

Перед взятием биоматериала пациенту рекомендуется воздержаться от мочеиспускания в течение

1.С помощью одноразового зонда делают соскоб эпителиальных клеток из соответствующего биотопа (крайняя плоть головки полового члена, препуциальный мешок) и переносят зонд в пробирку с транспортной средой, обламывают и оставляют.

Условия хранения и транспортировки биоматериала:

1. Пробирки с полученным клиническим материалом должны быть промаркированы.

2. В сопроводительном документе-направлении необходимо указать: ФИО, возраст пациентки (та), клинический материал, предполагаемый диагноз, показания к обследованию, дату и время взятия пробы, наименование учреждения (подразделения), направляющего клинический материал.

3. Если время транспортировки клинического материала от момента взятия до момента его доставки в лабораторию не более суток, то пробирку с клиническим материалом необходимо хранить и доставлять в лабораторию при температуре бытового холодильника (+ 4+10°С), не замораживая.

Особенности взятия эякулята (семенной жидкости):

Внимание! Перед взятием эякулята рекомендуется половое воздержание в течение трёх суток до исследования.

1.Перед сбором эякулята пациент мочится в туалете, пол-

ностью опорожняя мочевой пузырь.

2.После мочеиспускания пациент должен тщательно вы- мыть руки с мылом и провести туалет наружных половых органов с мылом и водой, головку полового члена и крайнюю плоть необходимо высушить стерильной салфеткой.

3.Эякулят получают путем мастурбации и собирают в стерильный контейнер объёмом до 60 мл.

4.Емкость с эякулятом герметично закрывают крышкой и маркируют.

Условия хранения материала:

- при комнатной температуре — в течение 6 часов;

- при температуре +2+8 °С — в течение 1 суток;

5. Секрета простаты (предстательной железы)

Внимание! Перед взятием секрета простаты рекомендуется половое воздержание в течение трёх суток до исследования.

При подозрении на острый простатит выполнять массаж простаты категорически запрещено.

1.Перед взятием секрета простаты головку полового члена обрабатывают стерильным ватным тампоном, смоченным физиологическим раствором.

2.Секрет простаты собирают после предварительного массажа простаты через прямую кишку, массаж проводит врач посредством энергичного надавливающего движения от основания к верхушке железы.

3.После окончания массажа выделившийся простатический секрет в виде свободно стекающей капли (0,5-1,0 мл) собирают в одноразовую сухую стерильную пробирку объёмом 2 мл или контейнер объёмом до 60 мл.

4.Емкость с секретом простаты герметично закрывают крышкой и маркируют.

Условия хранения материала:

- при комнатной температуре — в течение 6 часов;

- при температуре 2−8 °С — в течение 1 суток;

6. Остаточная моча после массажа простаты

При невозможности получить секрет, сразу после массажа простаты, собирают первую порцию мочи (в которой содержится секрет предстательной железы) в количестве 15-25 мл.

Особенности взятия остаточной мочи после массажа простаты:

Внимание! Перед взятием остаточной мочи после массажа простаты рекомендуется половое воздержание в течение трёх суток до исследования.

При подозрении на острый простатит выполнять массаж простаты категорически запрещено.

1.Пациент мочится в туалете, оставляя часть мочи в мочевом пузыре.

2.Перед сбором мочи головку полового члена обрабатывают стерильным ватным тампоном, смоченным физиологическим раствором.

3.В течение 1-3 минут пациенту проводят массаж предстательной железы, интенсивность массажа зависит от консистенции простаты: при мягкой предстательной железе осуществляют несильные надавливания, при плотной консистенции простаты силу давления увеличивают.

4.После массажа простаты пациент собирает первые 10-

15 мл мочи в стерильный пластиковый контейнер для сбора мочи, объёмом до 60 мл.

5.Емкость с мочой герметично закрывают крышкой и маркируют.

Условия хранения материала:

- при комнатной температуре — в течение 6 часов;

- при температуре +2+8 °С — в течение 1 суток;

1.Биопсийный материал помещают в стерильную пробирку со стерильным физраствором или водой (не более 0,5 мл) или в пустую стерильную пробирку.

2. Емкость с биоптатом герметично закрывают крышкой и маркируют.

Условия хранения и перевозки материала:

- при комнатной температуре — в течение 6 часов;

8.Биопсийный или аутопсийный материал

Материал забирают из зоны предполагаемого местонахождения возбудителя инфекции, из поврежденной ткани или из пограничного с поврежденным местом участка.

Кусочки ткани диаметром не более 5 мм помещают в одноразовые стерильные пробирки объемом 2 мл, содержащих соответствующую транспортную среду. Пробирку плотно закрывают. Макроаутоптат помещают в контейнер с физиологическим раствором или специальной транспортной средой.

Условия хранения и перевозки материала:

- при комнатной температуре — в течение 6 часов;

- при температуре +2+8 °С — в течение 3 суток;

- при температуре минус 20 °С — в течение 1 недели.

Материал забирают сухим стерильным ватным тампоном на пластиковой основе под местной анестезией (2 капли раствора декаина). Оттянув нижнее веко, вращающими движениями проводят зонд 4-5 раз по конъюнктиве, захватывая внешний и внутренний углы глаза.

После взятия материала тампон (рабочую часть зонда с ватным тампоном) помещают в одноразовую стерильную пробирку с защелкивающейся крышкой объемом 2 мл, содержащую соответствующую транспортную среду. Погрузив рабочую часть зонда в транспортную среду, аккуратно обламывают пластиковый стержень на расстоянии не более 0,5 см от рабочей части и оставляют рабочую часть зонда с материалом в транспортной среде. Пробирку плотно закрывают крышкой.

Условия хранения и перевозки материала

- при комнатной температуре — в течение 6 часов;

- при температуре +2+8 °С — в течение 3 суток;

Слезную жидкость в количестве не менее 0,5 мл собирают, используя одноразовые пластиковые пипетки, в одноразовые стерильные пластиковые пробирки объемом 1,5 или 2,0 мл. Для усиления слезоотделения проводят провокацию слезоточивым веществом (обычно используют нашатырный спирт).

Условия хранения и перевозки материала:

- при температуре +2+8 °С — в течение 1 суток.

Используют пробы фекалий массой (объемом) примерно 1−3 г (1−3 мл). Исследование мазков неинформативно из-за низкого содержания в них возбудителей. Пробу в количестве 1 г (примерно) отдельным наконечником с фильтром или одноразовыми лопатками переносят в специальный стерильный флакон.

Условия хранения и перевозки материала:

Образцы нативных фекалий:

- при комнатной температуре — в течение 6 часов;

Спинномозговую жидкость в количестве не менее 1 мл собирают, используя одноразовые иглы, в одноразовые пластиковые про- бирки объемом 1,5 или 2,0 мл.

Условия хранения и перевозки материала:

- при температуре +2+8 °С — в течение 1 суток;

Перед получением слюны проводят трехкратное полоскание полости рта физиологическим раствором. Слюну забирают в количестве не менее 1,0 мл в одноразовые стерильные пластиковые пробирки объемом 2 мл. Пробирку плотно закрывают крышкой.

Условия хранения материала:

- при комнатной температуре — в течение 6 ч;

Взятие мокроты осуществляют в количестве не менее 1,0 мл в одноразовые градуированные стерильные флаконы с широким горлом и завинчивающимися крышками объемом не менее 50 мл. См. на сайте правила сбора мокроты.

Условия хранения и перевозки материала:

- при комнатной температуре — в течение 6 часов;

- при температуре +2+8 °С — в течение 3 суток;

15.Бронхоальвеолярный лаваж или промывные воды бронхов

Взятие материала осуществляют в одноразовые, плотно завинчивающиеся пробирки объемом 50 мл или в пробирку с 6% ЭДТА ,сиреневые крышки.

Условия хранения и перевозки материала:

- при температуре +2+8 °С — в течение 1 суток;

Мазки берут сухими стерильными ватными тампонами на пластиковой основе. Тампон вводят легким движением по наружной стенке носа на глубину 2−3 см до нижней раковины. Затем тампон слегка опускают книзу, вводят в нижний носовой ход под нижнюю носовую раковину, делают вращательное движение и удаляют вдоль наружной стенки носа. После взятия материала тампон (рабочую часть зонда с ватным тампоном) помещают в стерильную одноразовую пробирку с защелкивающейся крышкой, содержащую соответствующую транспортную среду, и аккуратно обламывают пластиковый стержень на расстоянии не более 0,5 см от рабочей части, оставляя рабочую часть зонда с материалом в транспортной среде. Пробирку плотно закрывают крышкой.

Условия хранения и перевозки материала:

- при комнатной температуре — в течение 6 часов;

Взятие материала проводят в положении больного сидя с отклоненной назад головой путем введения с помощью одноразового шприца (зонда) теплого стерильного изотонического раствора натрия хлорида (3−5 мл) поочередно в каждый из носовых ходов. Промывную жидкость собирают через стерильную воронку в одну стерильную пробирку.

Не допускается повторное использование воронки без предварительного обеззараживания паром под давлением.

Условия хранения материала:

- при температуре +2+8 °С — в течение 6 ч;

Мазки берут сухими стерильными ватными тампонами на пластиковой основе вращательными движениями с поверхности миндалин, небных дужек и задней стенки ротоглотки. После взятия материала тампон (рабочую часть зонда с ватным тампоном) помещают в стерильную одноразовую пробирку со специальной транспортной средой и аккуратно обламывают пластиковый стержень на расстоянии не более 0,5 см от рабочей части, оставляя рабочую часть зонда с материалом в транспортной среде. Пробирку плотно закрывают крышкой.

Условия хранения и перевозки материала:

- при комнатной температуре — в течение 6 часов;

Перед взятием смывов из ротоглотки проводят предварительное полоскание полости рта водой. После этого проводят тщательное полоскание ротоглотки в течение 10−15 с 25−40 мл изотонического раствора натрия хлорида. Жидкость собирают через стерильную воронку в стерильный флакон объемом 50-60 мл.

Условия хранения и перевозки материала:

- при комнатной температуре — в течение 6 часов;

Перед взятием материала кожные элементы очищают ватным тампоном, смоченным эфиром или спиртом, затем прокалывают их у основания стерильной иглой или тонким капилляром пастеровской пипетки. Для ускорения поступления материала элемент сверху надавливают пинцетом. Корку или верхнюю часть везикул отделяют от кожи иглой, скальпелем. Исследуемый материал помещают в пробирку с транспортной средой.

Условия хранения и перевозки материала:

- при комнатной температуре — в течение 6 часов;

Для удаления присосавшегося клеща следует обратиться в травмпункт по месту жительства. При отсутствии такой возможности удалить присосавшегося клеща самостоятельно одним из следующих способов:

1.Накинуть на основание погружённого хоботка петлю из простой нити. Снимать клеща с кожных покровов следует осторожно, чтобы не оторвать хоботок!

2.Концы нити соединить вместе и медленно скручивать до полного затягивания петли и извлечения клеща. Избегайте раздавливания клеща!

3.Поместить клеща в сухую чистую пробирку объемом 1,5 мл.

При возможности клеща можно удалить при помощи кусочка льда, приложив его к месту присасывания на некоторое время. От холода клещ сам вытаскивает хоботок и отделяется.

Извлечённого клеща необходимо доставить в учреждение, где проведут исследование на заражённость его вирусом клещевого энцефалита.

При этом необходимо помнить, что:

1.Клещей нельзя смазывать маслами, кремами, вазелином, керосином и т.п.

2.Для исследования пригодны живые клещи, высушенные.

3.Удалённого клеща следует поместить в чистую посуду (пробирка, пузырёк, баночка и т.д.), в которую с целью создания повышенной влажности предварительно поместить чуть смоченную водой бумажную салфетку.

4.Хранение и доставка клещей с соблюдением вышеуказанных условий возможны в течение 2 суток.